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2016肿瘤细胞凋亡实验攻略

时间:2024-11-12 06:43:35

细胞凋亡(Apoptosis)是为了维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡是一个的主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,而不是病理条件下,自体损伤的一种现象,主要是为了更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

工具/原料

Annexin V -FITC Apoptosis Dection kit,1X PBS,细胞,0.25%胰酶,2.0mL离心管,4℃冷冻离心机

微型台式真空泵,流式细胞仪

1.细胞处理:

1、将6孔板中的培养基收集到2.0mL的离心管中,每孔加1.0mLPBS洗涤细胞,聪艄料姹再加200ul的胰酶进行消化,具体时间视情况而定。

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2、待消化好,加2ML的培养基终止消化,吹打细胞,将细胞混悬液加入2mL离心管中,4℃,1200r/min,离心5min,弃去培养液。

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2.细胞染色:

1、用冷的PBS洗2次,然后用1X的结合液重悬细胞(1*10^6cells/mL),一般结合液加入体积500-800mL。

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2、将100ul细胞悬液(1*10^5cells)转移至1.5ML离心管中。

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3、加5uL的FITC AnnexinV和5ul的PI。

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4、轻轻涡旋细胞且避光,常温25℃的条件下孵育15min。

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5、每管加400ul的1X结合液。

3.流式分析

1、提前15min,打开流式细胞仪进行清洗;

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2、进行样品测定区域的选择,并用正常的细胞进行调整电压,并进行设门。

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3、开始测定样品,待测定完成后,进行分析,并进行保存,最后清洗仪器,待仪器清洗完成后关闭软件,最后关闭仪器。

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